复合酶法提取红枣多糖工艺的研究
摘要：以红枣为材料，运用正交实验法研究不同复合酶用量、提取温度、pH 和提取时间对红枣多糖提取率的影响，结果表明：复合酶添加量 1.0 g /100 g，提取温度 48 ℃，pH5.2，提取时间 2.2 h，红枣多糖的提取率最高，提取率为 4.61 g / 100 g。复合酶法优于热水浸提法。
枣 （Ziziphus jujuba Mill.） 为鼠李科枣属植物枣树的成熟果实，是一种营养丰富的传统果品，具有多种营养保健功能。研究表明，红枣多糖是红枣的主要活性成分，具有消除人体内的氧自由基、抗衰老、抗补体活性和促进淋巴细胞增殖等作用。目前，红枣多糖的研究与产业化开发已成为红枣精深加工领域的热点。
传统的提取红枣多糖的方法多为热水浸提法，该法提取率不高、提取时间长。酶技术是近年来广泛应用到有效成分提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可分解植物组织，加速多糖的释放和提取。目前，常用的酶有蛋白酶、纤维素酶、果胶酶等。因此，本工艺利用复合的蛋白酶、果胶酶、纤维素酶等对红枣中的蛋白质、果胶质、纤维素进行酶解处理，提高红枣多糖的浸出率，研究提取的适宜条件。
1 材料与方法
1.1 材料和仪器
红枣，由好想你枣业股份有限公司提供；酸性蛋白酶 （20 000 u / g）、济宁和美生物工程有限公司；纤维素酶 （10 000 u / mL）、果胶酶 （酶活力30 000 u / mL），枣庄市杰诺生物酶有限公司；其余所用试剂为分析纯。
UV- 2100 型紫外可见分光光度计，龙尼柯仪器公司；DK 一 600S 型电热恒温水浴锅上海精宏实验设备有限公司；RE5205 型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂。
1.2 方法
1.2.1 酶解提取红枣多糖
将大枣去核后，在烘箱中烘干，粉碎备用。称取10 g 枣粉加入 100 mL 蒸馏水并加入复合酶 （酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶同等活力单位混合）适量溶解，水浴酶解提取后4 000 r / min 离心 15min 得滤液，滤液浓缩到 50 mL，然后加入 3 倍体积的乙醇(体积浓度 95%)，醇沉过夜，4 000 r / min离心15 min，所得沉淀即为多糖粗品，55 ℃干燥至恒重。采用硫酸———苯酚法测定多糖粗品中多糖含量，按下式计算多糖提取率。
Y=W2W1，式中：Y—多糖提取率，g/ 100 g；
W2—提取得到的多糖质量；
W1—原料质量。
1.2.2 热水提取红枣多糖
精确称取红枣 50 g，加蒸馏水 500 mL，调 pH值至 7.0，回流 6h，冷却后 4 000 r / min 离心 15 min，所得滤液浓缩到 250 mL，加入 3 倍体积的乙醇(体积浓度 95%)，醇沉过夜，4 000 r / min 离心 15 min，所得沉淀即为多糖粗品。
2 结果与讨论
2.1 酶的用量对多糖提取率的影响
在 50 ℃、pH4.5 的条件下，分别添加不同质量的复合酶，提取 2 h，比较不同酶的用量对多糖提取率的影响。
复合酶的添加量分别为 1.0g/100g时，可充分发挥酶的作用，有效增加提取得率。
2.2 温度对红枣多糖提取率的影响
在 pH5.0、酶解时间 2 h 的条件下，添加复合酶 1.0 g/ 100 g，分别采用不同温度进行提取。温度为 50 ℃时，得率和纯度较高，故选择50 ℃提取较为适合。
2.3 pH 对红枣多糖提取的影响
在温度为 50 ℃、酶解时间 2 h 的条件下，添加复合酶1.0 g / 100 g，分别在不同 pH 值下进行提取。pH 为 5.0 时，得率和纯度较高，故选择 pH 为 5.0 提取较为适合。
2.4 提取时间对红枣多糖提取的影响
在温度为 50 ℃、pH 为 5.0 的条件下，添加复合酶 1.0 g/ 100 g，分别提取不同时间。提取 2 h，得率和纯度较高，故选择 2 h 提取较为适合。
2.5 复合酶提取工艺条件优化
在单因素试验的基础上，对酶的用量、提取温度、pH、提取时间对提取率的影响进行 L9（34）正交试验。
各因素的对提取得率的影响顺序为 A>D>C>B，即：酶的用量 > 提取时间 > pH>提取温度。比较 K值的大小可以看出，多糖提取工艺的优化条件是 A2B1C3D3，即酶的用量 1.0g/ 100 g、提取温度 48 ℃、pH5.2、提取时间 2.2 h，按此条件进行验证实验，多糖提取率为4.61 g / 100 g。取 1 kg枣进行放大试验，多糖多糖提取率也为4.61g/100g。由表 3F 检验结果表明，酶的用量和提取时间对提取率在所考察的范围内影响显著，而 pH、提取温度对提取率在所考察的范围内影响不显著。
2.6 复合酶提取和热水提取红枣多糖的比较
试验测得采用热水提取法提取红枣多糖的得率为 2.69 g/ 100 g，时间 6 h。由此可见，酶解方法的多糖提取率高于传统水提法，且时间短于传统水提法。
来源：惠合浓缩器
